【酵母双杂交技术的原理】酵母双杂交技术（Yeast Two-Hybrid, Y2H）是一种用于研究蛋白质之间相互作用的经典实验方法。该技术基于转录因子在真核生物中的功能，通过构建融合蛋白来检测两个目标蛋白是否发生相互作用。其核心原理是利用酵母细胞内的转录调控系统，将蛋白质间的相互作用转化为可检测的报告基因表达。
一、基本原理总结
酵母双杂交系统的核心在于“结合”与“激活”的分离。具体来说，该技术依赖于一种天然存在于酵母中的转录因子——如GAL4。这个转录因子由两个结构域组成：一个DNA结合结构域（BD）和一个转录激活结构域（AD）。当这两个结构域被分开时，它们无法单独激活下游报告基因的表达。
在实验中，研究人员将目标蛋白A与BD融合，形成“诱饵蛋白”；将目标蛋白B与AD融合，形成“猎物蛋白”。如果这两个蛋白能够发生相互作用，那么BD和AD就会靠近，从而恢复转录因子的功能，激活报告基因的表达，如LacZ或HIS3等。通过观察报告基因的表达情况，可以判断两种蛋白是否具有相互作用。
二、酵母双杂交技术原理对比表
| 项目 | 内容说明 |
| 技术名称 | 酵母双杂交技术（Yeast Two-Hybrid, Y2H） |
| 基本原理 | 利用转录因子的两个结构域（BD和AD）分离后，通过蛋白互作恢复其功能，激活报告基因表达 |
| 核心工具 | 转录因子GAL4（含BD和AD） |
| 构建策略 | 诱饵蛋白（BD + 目标蛋白A） + 猎物蛋白（AD + 目标蛋白B） |
| 互作检测 | 若蛋白A与蛋白B相互作用，则BD与AD接近，激活报告基因 |
| 报告基因 | 常见如LacZ、HIS3、ADE2等，用于筛选阳性克隆 |
| 应用领域 | 蛋白质相互作用研究、信号通路分析、药物靶点筛选等 |
| 优点 | 操作简便、灵敏度高、适用于多种真核蛋白 |
| 局限性 | 可能出现假阳性/假阴性、仅适用于细胞内可溶性蛋白 |
三、总结
酵母双杂交技术是研究蛋白质相互作用的重要工具，其原理简单而有效，广泛应用于分子生物学和蛋白质组学研究中。尽管存在一定的局限性，但随着技术的不断改进，该方法仍为探索蛋白质功能网络提供了重要的实验手段。
